超微量分光光度計的校準(zhǔn)是確保其測量準(zhǔn)確性和可靠性的核心環(huán)節(jié)，涉及多類方法與復(fù)雜流程。以下從校準(zhǔn)方式分類、技術(shù)原理、操作流程及實踐建議四方面展開闡述：

　　一、儀器自校準(zhǔn)功能

　　超微量分光光度計通常內(nèi)置自校準(zhǔn)程序，通過儀器自帶的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)(如暗電流校正、光源強(qiáng)度補(bǔ)償)對光學(xué)系統(tǒng)進(jìn)行初始化標(biāo)定。自校準(zhǔn)可快速修正電子漂移、光源老化等引起的偏差，是日常維護(hù)的基礎(chǔ)步驟。操作時需進(jìn)入儀器菜單，選擇“自校準(zhǔn)”或“性能驗證”模式，按提示執(zhí)行空白測量(如空氣或純水作為參比)，儀器會自動調(diào)整至出廠預(yù)設(shè)參數(shù)并生成校準(zhǔn)報告。但需注意，自校準(zhǔn)無法糾正波長偏移或光路物理變化(如光纖位移)，需結(jié)合其他方法定期驗證。

　　二、外部標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)

　　當(dāng)儀器用于定量分析(如核酸、蛋白濃度測定)時，需通過標(biāo)準(zhǔn)溶液驗證吸光度準(zhǔn)確性。常用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)包括霍姆斯緩沖液(HRP，用于紫外區(qū)校準(zhǔn))和NIST追溯標(biāo)準(zhǔn)溶液(如重鉻酸鉀溶液，用于多波長交叉驗證)。操作時需用移液槍精確滴加0.3-2μL標(biāo)準(zhǔn)液，形成穩(wěn)定液柱(光程0.05-0.5mm)，并在目標(biāo)波長下測量不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算儀器線性相關(guān)系數(shù)(R²>0.995為合格)。同時，需使用同批次溶劑(如超純水)作為參比，避免溶劑雜質(zhì)干擾。

　　三、波長準(zhǔn)確性校驗

　　波長準(zhǔn)確性直接影響定性分析(如特征吸收峰識別)。由于氙燈光源或LED光源可能發(fā)生波長漂移，需定期校驗。具體方法包括汞燈特征譜線法(利用汞燈在253.6nm、296.7nm等處的尖銳吸收峰，對比儀器顯示波長與實際峰值偏差，應(yīng)<±1nm)、Horia溶液法(通過鈥玻璃在可見光區(qū)的多條特征吸收峰進(jìn)行多點校準(zhǔn))以及軟件校準(zhǔn)(部分機(jī)型支持自動掃描標(biāo)準(zhǔn)濾光片，通過算法修正波長偏移)。

　　四、穩(wěn)定性與重復(fù)性檢測

　　短期穩(wěn)定性檢測可通過連續(xù)測量同一標(biāo)準(zhǔn)樣品(如1mg/mL BSA溶液)至少6次，記錄吸光度值(如280nm下誤差應(yīng)<±0.005OD)，并檢查基線噪聲(通常要求<0.002OD)以評估光路穩(wěn)定性。長期穩(wěn)定性檢測則需每月進(jìn)行一次全波長范圍(200-1000nm)的基線掃描，觀察雜散光和波長重復(fù)性，并使用標(biāo)準(zhǔn)溶液周期性驗證(如每周一次)，記錄偏差趨勢。

　　超微量分光光度計的校準(zhǔn)是一個綜合性的過程，需要操作人員具備豐富的專業(yè)知識和實踐經(jīng)驗。通過嚴(yán)格按照校準(zhǔn)流程進(jìn)行操作，并注意每一個細(xì)節(jié)問題，可以確保儀器的準(zhǔn)確性和可靠性，從而為科研和生產(chǎn)提供有力的技術(shù)支持。